CRISPR/Cas9システムを使って遺伝子改変ラット(ノックイン)を作製する方法を紹介しています。
今回は、ガイドRNAの発注です。
ガイドRNAを合成する方法はさまざまありますが、簡単なのはRNA合成を企業に発注することです。
2.ガイドRNAの発注
・Integrated DNA Technologies (IDT) に依頼する場合を紹介します。
IDTのHPにアクセス
CRISPR-Cas9 genome editingのページへ
Alt-R(TM) CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmolを発注
配列等を入力
・CRISPR-Cas9を働かせるには、tracrRNAとCas9 nucleaseが必要です。
これらも一緒に購入できます。
・語句説明
crRNA:ターゲットに特異的なRNAオリゴです。
tracrRNA:crRNAと結合し、Cas9と複合体を形成します。
Cas9 Nuclease 3NLS:crRNA:tracrRNA duplexに結合します。
核移行シグナルが3つ付加されています。