2017年3月23日木曜日

ガイドRNAの発注

CRISPR/Cas9システムを使って遺伝子改変ラット(ノックイン)を作製する方法を紹介しています。

今回は、ガイドRNAの発注です。

ガイドRNAを合成する方法はさまざまありますが、簡単なのはRNA合成を企業に発注することです。

2.ガイドRNAの発注
  ・Integrated DNA Technologies (IDT) に依頼する場合を紹介します。
   IDTのHPにアクセス
   CRISPR-Cas9 genome editingのページへ
   Alt-R(TM) CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmolを発注
   配列等を入力

  ・CRISPR-Cas9を働かせるには、tracrRNAとCas9 nucleaseが必要です。
   これらも一緒に購入できます。

  ・語句説明
   crRNA:ターゲットに特異的なRNAオリゴです。
   tracrRNA:crRNAと結合し、Cas9と複合体を形成します。
   Cas9 Nuclease 3NLS:crRNA:tracrRNA duplexに結合します。
              核移行シグナルが3つ付加されています。